引物长度：

引物长度通常在15～30bp之间，常用的为18～27bp。

不建议引物长度大于38bp，因为过长的引物可能导致与模板DNA的结合能力下降，并且最适延伸温度可能超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃），从而影响产物的特异性。

GC含量：

G+C含量应在40%～60%之间，以45%～55%为宜。

上下游引物的GC含量应保持接近，以确保Tm值（熔解温度）相近，使得复性条件最佳。

Tm值：

引物所对应模板位置序列的Tm值应在72℃左右，这有助于优化PCR反应条件。

避免自身互补：

引物设计时应避免含有自身互补的碱基序列，以防止引物之间形成二聚体，影响PCR扩增效率。

避免特定结构：

引物设计时应尽量避免出现二硫键或普鲁文结构（如三个或四个相邻的G或C碱基），这些结构可能影响引物的稳定性和PCR扩增效率。

修饰：

在引物的3'端末端，可以引入一些修饰，如磷酸化或5-末端的过氧化磷酸，以提高合成效率和PCR反应的特异性。

发货形式默认1mg/管发货，不分装。客户收到后可以溶解分装冷冻，一次取用一管。

ddH2和生理盐水

根据来源和性质的不同，分为基因组探针、cDNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针

1. 成本

考虑降低成本的情况，水解探针和蝎形探针是很好的选择。与目前市面上所有的荧光探针相比，水解探针是目前市场上可靠，而且便宜的一种，如TaqMan和MGB探针。蝎形探针由于引物的发卡结构，不需要开发和购买单独的探头，成为一个方便且具成本效益的选择。

2. 时间

考虑时间的情况，蝎形探针是首选解决方案。不仅引物和探针存在于一个发卡结构分子上，而且可以在快速循环条件下工作。水解探针也是理想的，因为它们非常可靠，问题发生频次最低。这些往往被广泛用于高通量扩增分析。

3. 特异性

如果目标序列很少，可以考虑分子信标探针和双杂交探针。当结合到目标时，分子信标探针发射的荧光量通常比在自由溶液中释放的光量大100倍。双杂交探针有两个探针与扩增产物杂交，可以有更高的特异性。

特异性：确保siRNA序列特异性靶向目标基因，避免脱靶效应。

有效性：筛选具有高沉默效率的siRNA序列。

稳定性：优化siRNA序列以提高其在细胞内的稳定性和有效性。

1. 生物学实验：如基因敲除、基因沉默等。

2. 药物研发：用于开发新的药物候选物，或优化现有药物的药效和安全性。

3. 基因编辑：如CRISPR-Cas9基因编辑系统，需要特定的ASOs作为引导序列。

4. 临床诊断：用于诊断疾病的生物标志物检测等。

病毒载体的滴度测定通常采用qPCR、ddPCR、ELISA、TEM或基于细胞的感染实验等方法，以确定病毒颗粒的数量或感染单位。

宿主细胞的选择取决于病毒载体的类型和目标应用，常用的宿主细胞包括HEK293T、HeLa、COS-7等，这些细胞系易于培养且适合病毒的复制和包装。

病毒颗粒通常在-80℃以下储存，并在运输过程中使用干冰或冰袋保持低温，以保持病毒的活性和稳定性。

基因编辑是对基因组进行编辑。目前已经成熟的物种有大肠杆菌，酿酒酵母和毕赤酵母。

按实验目的可分为：基因敲入、基因敲除、点突变。

简单来说，原核基因编辑相差不大，我们目前使用的是CRISPR/Cas9基因编辑。真核Cas12a更有优势。

与Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，质粒或蛋白更容易进入细胞

2 从经济方面来讲，Cas12a用crRNA进行编辑，crRNA约40-44nt，其合成的价格远低于sgRNA(约100nt)

3 识别位点PAM序列不同。Cas12a核酸酶识别5’-TTTV，切割产生交错末端。Cas9切割产生平末端