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CRISPR sgRNA文库定制化

研究基因在代谢通路或某些特定疾病发生过程中的功能，对于疾病机理研究及药物研发具有非常重要的意义。新一代基因编辑技术CRISPR以其操作简单和通用的独特优势，成为开展正向遗传学筛选实验强有力的工具。利用CRISPR技术建立可能与某类功能相关的突变体库，通过功能性筛选和富集、PCR扩增及深度测序分析，确认与这类功能相关的基因。

豪利777生物利用独创的“GPS”（Genotype，Phenotype，Synotype）平台，提供基于CRISPR sgRNA文库的一站式基因功能筛选服务。我们专利的Syno^®合成技术平台，可以快速高效地实现sgRNA文库构建，并包装成慢病毒混合文库后转染细胞。结合高通量/高内涵筛选平台，利用控制细胞存活、结合免疫染色、流式细胞术等手段筛选得到所需细胞，最终通过测序等方法推断出发挥作用的靶基因。

服务优势

针对客户需求的模式物种进行sgRNA设计
自由选择sgRNA表达载体，提供转染级质粒
提供从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务

服务详情

服务项目	服务详情	周期
sgRNA设计	针对特定基因分类进行gRNA序列设计每个基因设计3-6条sgRNA	1-2周
芯片合成	将所设计的所有sgRNA及阴性对照合成在一张芯片上	3-4周
sgRNA文库构建	将sgRNA构建到客户的目标载体上	2-3周
文库质粒大抽	根据发货量进行转染级质粒抽提	1周
文库质检及NGS验证(可选)	1. 克隆覆盖倍数必须大于100倍 2. 克隆正确率大于70% 3. NGS验证的文库正确率大于99% 4. NGS验证文库的均一性指标小于10	2-3周
病毒包装(可选)	慢病毒包装，病毒滴度: 10⁸TU/ml	2-3周
总计		11-16周

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服务流程

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已知药物功能筛选其耐药靶点的方案：

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

1. 明确该药物功能及其致死工作浓度。

2. 构建CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞，构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。

3. 筛选：高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆，成活的细胞即为产生耐药性的细胞，其耐药性的产生原因是CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。

4. 存活的细胞通过二代测序，比对得到gRNA 信息，从而推断出起作用的基因靶点。

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已知药物功能筛选其耐药靶点的方案：

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)